
腺病毒ADV
腺病毒(Adenovirus, ADV)是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒,具有廣泛的細胞和組織感染能力。感染過程劇烈,適於短時間內進行基因高表達的實驗,與其它病毒相比,腺病毒優勢在於插入片段較長,表達活性強。
體外應用時,腺病毒載體轉基因效率高(接近100%的轉導效率),且可轉導不同類型的細胞,對於大量難轉染細胞的基因遞送是一個很好的工具。但是,在體內應用時,由於腺病毒免疫原性強,感染劇烈,故常會引起動物局部組織炎症反應和機體免疫反應,對動物體徵和實驗結果的客觀性造成影響。
腺病毒包裝與純化
腺病毒包裝骨架達質粒與穿梭質粒共轉染HEK-293細胞,待細胞出現CPE狀態後通過收集細胞上清和細胞裂解物,通過濃縮或氯化銫密度梯度離心純化病毒。
CPE(Cytopathic Effect):病毒對組織培養細胞侵染後產生的細胞變性,利用此種病變效應可進行病毒定量。
腺病毒滴度檢測
檢測方法:酶聯免疫法腺病毒滴度測定,根據計算感染後染成褐色的陽性細胞數,來計算病毒滴度。
實驗原理:腺病毒感染的陽性細胞表達的衣殼蛋白被染成褐色。
檢測方法:免疫顯色方法
實驗原理:通過抗5型腺病毒外殼蛋白的單抗與待感染腺病毒樣品的細胞結合,再用HRP標記的二抗與一抗結合,經顯色液顯色,被感染的細胞變成褐色,根據陽性細胞數,來計算病毒滴度。
腺病毒載體優勢
① 表達快,腺病毒感染細胞後,1-2天即可表達
② 載體容量大,感染效率高,常用於感染難感染的細胞
③ 不整合到染色體中,無插入致突變性
④ 具有嗜肝性,易於感染肝細胞,腺病毒的體內應用是用於感染肝臟
不過由於腺病毒免疫原性高,對某些對外源刺激敏感的動物模型和組織中易造成炎症,體內應用需謹慎。
不同病毒的生物学特性比较
載體選擇
和元生物擁有豐富的腺病毒產品,用於操作編碼基因和非編碼基因,如lncRNA、microRNA、circRNA。
以下腺病毒載體可供您選擇:
调控方式 | 载体编号 | 载体名称(载体元件顺序) | 真核抗性 | 荧光 | 启动子 | 默认标签 | 载体容量 |
过表达 | H225 | pADV-mCMV-MCS-3xFLAG | N/A | N/A | mCMV | 3FLAG | >6kb |
H201 | pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG | N/A | EGFP | mCMV | 3FLAG | >5kb | |
H213 | pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP | N/A | EGFP | mCMV | 3FLAG | >5kb | |
H221 | pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFP | N/A | EGFP | mCMV | 3FLAG | >5kb | |
H204 | pADV-mCMV-mCherry-HA | N/A | mCherry | mCMV | HA | >5kb | |
H222 | pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherry | N/A | mCherry | mCMV | 3FLAG | >5kb | |
H12588 | pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG | N/A | mNeonGreen | CMV | 3FLAG | >4kb | |
H12589 | pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAG | N/A | mScarlet | CMV | 3FLAG | >4kb | |
circRNA过表达 | H6946 | pADV-CMV-S-circRNA | N/A | N/A | CMV | N/A | >5kb |
miRNA过表达 | H216 | pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP | N/A | EGFP | U6 | N/A | N/A |
表达cre | K0024 | pADV-CMV-Cre | N/A | N/A | CMV | N/A | N/A |
干扰 | DKD001 | pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP | N/A | EGFP | U6 | N/A | N/A |
DKD004 | pADV-U6-shRNA-CMV-mCherry | N/A | mCherry | U6 | N/A | N/A | |
CRISPR敲除 | H5064 | pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9 | N/A | N/A | U6 | 3FLAG | N/A |
H9350 | pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9 | N/A | sfGFP | U6 | 3FLAG | N/A | |
H5066 | pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP | N/A | EGFP | U6 | N/A | N/A | |
H218 | pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9 | N/A | mCherry | CMV | 3FLAG | N/A | |
H5449 | pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1 | N/A | mCherry | CMV | 3FLAG | N/A |
应用实例



留下評論