腺病毒ADV
腺病毒（Adenovirus, ADV）是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒，具有廣泛的細胞和組織感染能力。感染過程劇烈，適於短時間內進行基因高表達的實驗，與其它病毒相比，腺病毒優勢在於插入片段較長，表達活性強。
體外應用時，腺病毒載體轉基因效率高（接近100%的轉導效率），且可轉導不同類型的細胞，對於大量難轉染細胞的基因遞送是一個很好的工具。但是，在體內應用時，由於腺病毒免疫原性強，感染劇烈，故常會引起動物局部組織炎症反應和機體免疫反應，對動物體徵和實驗結果的客觀性造成影響。
腺病毒包裝與純化
腺病毒包裝骨架達質粒與穿梭質粒共轉染HEK-293細胞，待細胞出現CPE狀態後通過收集細胞上清和細胞裂解物，通過濃縮或氯化銫密度梯度離心純化病毒。
CPE（Cytopathic Effect）：病毒對組織培養細胞侵染後產生的細胞變性，利用此種病變效應可進行病毒定量。
腺病毒滴度檢測
檢測方法：酶聯免疫法腺病毒滴度測定，根據計算感染後染成褐色的陽性細胞數，來計算病毒滴度。
實驗原理：腺病毒感染的陽性細胞表達的衣殼蛋白被染成褐色。
檢測方法：免疫顯色方法
實驗原理：通過抗5型腺病毒外殼蛋白的單抗與待感染腺病毒樣品的細胞結合，再用HRP標記的二抗與一抗結合，經顯色液顯色，被感染的細胞變成褐色，根據陽性細胞數，來計算病毒滴度。
腺病毒載體優勢
① 表達快，腺病毒感染細胞後，1-2天即可表達
② 載體容量大，感染效率高，常用於感染難感染的細胞
③ 不整合到染色體中，無插入致突變性
④ 具有嗜肝性，易於感染肝細胞，腺病毒的體內應用是用於感染肝臟
不過由於腺病毒免疫原性高，對某些對外源刺激敏感的動物模型和組織中易造成炎症，體內應用需謹慎。
不同病毒的生物学特性比较
載體選擇
和元生物擁有豐富的腺病毒產品，用於操作編碼基因和非編碼基因，如lncRNA、microRNA、circRNA。
以下腺病毒載體可供您選擇：
| 调控方式 | 载体编号 | 载体名称（载体元件顺序） | 真核抗性 | 荧光 | 启动子 | 默认标签 | 载体容量 |
| 过表达 | H225 | pADV-mCMV-MCS-3xFLAG | N/A | N/A | mCMV | 3FLAG | >6kb |
| H201 | pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG | N/A | EGFP | mCMV | 3FLAG | >5kb | |
| H213 | pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP | N/A | EGFP | mCMV | 3FLAG | >5kb | |
| H221 | pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFP | N/A | EGFP | mCMV | 3FLAG | >5kb | |
| H204 | pADV-mCMV-mCherry-HA | N/A | mCherry | mCMV | HA | >5kb | |
| H222 | pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherry | N/A | mCherry | mCMV | 3FLAG | >5kb | |
| H12588 | pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG | N/A | mNeonGreen | CMV | 3FLAG | >4kb | |
| H12589 | pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAG | N/A | mScarlet | CMV | 3FLAG | >4kb | |
| circRNA过表达 | H6946 | pADV-CMV-S-circRNA | N/A | N/A | CMV | N/A | >5kb |
| miRNA过表达 | H216 | pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP | N/A | EGFP | U6 | N/A | N/A |
| 表达cre | K0024 | pADV-CMV-Cre | N/A | N/A | CMV | N/A | N/A |
| 干扰 | DKD001 | pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP | N/A | EGFP | U6 | N/A | N/A |
| DKD004 | pADV-U6-shRNA-CMV-mCherry | N/A | mCherry | U6 | N/A | N/A | |
| CRISPR敲除 | H5064 | pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9 | N/A | N/A | U6 | 3FLAG | N/A |
| H9350 | pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9 | N/A | sfGFP | U6 | 3FLAG | N/A | |
| H5066 | pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP | N/A | EGFP | U6 | N/A | N/A | |
| H218 | pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9 | N/A | mCherry | CMV | 3FLAG | N/A | |
| H5449 | pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1 | N/A | mCherry | CMV | 3FLAG | N/A |
应用实例
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